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技術文章

生長激素釋放肽ghrelin檢測范圍多少?

更新時間:2022-08-19 瀏覽次數(shù):1477

本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本人生長激素釋放肽ghrelinGHRP-Ghrelin含量。

有效期:6個月

保存條件:2-8

上海軒澤康生物有限公司提供

試劑盒組成:

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標板

12×8

12×4

標準品

0.3mL*6

0.3mL*6

生物素標記抗體

6mL

3mL

樣本稀釋液

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說明書進行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2

2

說明書

1

1

自封袋

1

1


1. 96T/48T)打開包裝后請及時檢查所有物品是否齊全。

2. 標準品濃度依次為:1600、800、400、200100、0 pg/mL

3. 經(jīng)過大量正常標本檢驗,標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內,實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時,可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。

檢測前準備工作:

1. 請?zhí)崆?/span>20分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。

2. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶,屬于正?,F(xiàn)象;放置室溫,輕搖均勻,待結晶*溶解后再配置洗滌液。可將20ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液,未用完的放回4

3. 2洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按120稀釋,即120×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。。


實驗原理:

試劑盒采用雙抗體步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人生長激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)捕獲抗體包被微孔中,依次加入標本、標準品孵育,加入生物化抗體進行抗體生物素化,經(jīng)過溫育并*后加入HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人生長激素釋放肽ghrelinGHRP-Ghrelin呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

實驗所需自備試驗器材:

1. 酶標儀(450nm

2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL2-20uL、20-200uL200-1000uL

3. 37恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水


樣本處理及要求:

1. 血清:將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

2. 血漿:EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內于2-81000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

3. 組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mLPBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。

4. 細胞培養(yǎng)物上清:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

5. 其它生物標本:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測。

6. 樣品外觀:樣品應清澈透明,懸浮物應離心去除。

7. 樣品保存:樣品收集后若在1周內進行檢測的可保存于4℃,若不能及時檢測,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃(1個月內檢測),或-80℃(6個月內檢測),避免反復凍融,標本溶血會影響最后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

注意事項:

1. 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25。使用后立即冷藏保存試劑。

2. 洗板不正確可以導致不的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。

4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。

6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

9. 不能使用過期產(chǎn)品。

10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。


郵箱:wwwwangji130@163.com

地址:上海市金山區(qū)呂巷鎮(zhèn)璜溪西街88號

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